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       氣相色譜剖析的重要作用之一是對樣品定量。而氣相色譜法定量的依據(jù)是：組分的重量或在載氣中的濃度與檢測器的響應(yīng)信號成正比。常見定量剖析辦法分為面積歸一化法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、規(guī)范曲線法等。大家常常簡略傻傻分不清楚的莫過于內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法了。

       以內(nèi)標(biāo)法為例，選一與欲測組分鄰近但能撤底分離的組分做內(nèi)標(biāo)物（當(dāng)然是樣品中沒有的組分），然后制造欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的混合規(guī)范溶液，進樣得相對校對因子。再將內(nèi)標(biāo)物參加欲測組分的樣品中，進樣后測得欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的定量參數(shù)，用內(nèi)標(biāo)法公式核算即可。

       其實，從界說上來區(qū)分的話，外標(biāo)法便是用規(guī)范品的峰面積或峰高與其對應(yīng)的濃度做一條規(guī)范曲線,測出樣品的峰面積或峰高,在規(guī)范曲線上查出其對應(yīng)的濃度,這常用的一種定量辦法；內(nèi)標(biāo)法是對應(yīng)外標(biāo)法說的，內(nèi)標(biāo)法是將必定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，參加到精卻稱量的試樣中，依據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來核算被測組分的含量。

      外標(biāo)法需求用樣品和規(guī)范品比照，可是有時我們很難保證樣品和規(guī)范品進的體積是一樣的，究竟要有差錯，這時分就用內(nèi)標(biāo)法，便是在外標(biāo)法的基礎(chǔ)上,在樣品和規(guī)范品里在參加一種物質(zhì)，通過參加物質(zhì)的峰面積或峰高的改變,就能夠看出我們規(guī)范品和樣品進樣體積的差別，但一起會引進參加物質(zhì)的秤量差錯。所以一般用外標(biāo)法來定量,假如進樣體積很難掌握，就用內(nèi)標(biāo)法，能夠消除進樣體積的差錯。

外標(biāo)法（規(guī)范曲線法、直接比較法）

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首要用欲測組分的規(guī)范樣品制作規(guī)范作業(yè)曲線。詳細作法是：用規(guī)范樣品制造成不同濃度的規(guī)范系列，在與欲測組分相同的色譜條件下，等體積精卻量進樣，丈量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度制作規(guī)范作業(yè)曲線，此規(guī)范作業(yè)曲線應(yīng)是通過原點的直線。若規(guī)范作業(yè)曲線不通過原點，說明測定辦法存在系統(tǒng)差錯。規(guī)范作業(yè)曲線的斜率即為精卻校對因子。

當(dāng)欲測組分含量改變不大，并已知這一組分的大約含量時，也能夠不用制作規(guī)范作業(yè)曲線，而用單點校對法，即直接比較法定量。單點校對法實際上是運用原點作為規(guī)范作業(yè)曲線上的另一個點。因此，當(dāng)辦法存在系統(tǒng)差錯時（即規(guī)范作業(yè)曲線不通過原點），單點校對法的差錯較大。因此規(guī)則，y=ax+b b的值應(yīng)不大于100%響應(yīng)值是y的2%。

規(guī)范曲線法的長處：制作好規(guī)范作業(yè)曲線后測定作業(yè)就很簡略了，核算時可直接從規(guī)范作業(yè)曲線上讀出含量，這對大量樣品剖析十分適宜。特別是規(guī)范作業(yè)曲線制作后能夠運用一段時間，在此段時間內(nèi)可經(jīng)常用一個規(guī)范樣品對規(guī)范作業(yè)曲線進行單點校對，以承認該規(guī)范作業(yè)曲線是否還可運用。

規(guī)范曲線法的缺陷：每次樣品剖析的色譜條件（檢測器的響應(yīng)功能，柱溫度，活動相流速及組成，進樣量，柱效等）很難特別相同，因此簡略呈現(xiàn)較大差錯。別的，規(guī)范作業(yè)曲線制作時，一般運用欲測組分的規(guī)范樣品（或已知精卻含量的樣品），因此對樣品前處理過程中欲測組分的改變無法進行補償。

內(nèi)標(biāo)法

挑選適合的物質(zhì)作為欲測組分的參比物，定量加到樣品中去，依據(jù)欲測組分和參比物在檢測器上的響應(yīng)值（峰面積或峰高）之比和參比物參加的量進行定量剖析的辦法稱為內(nèi)標(biāo)法。

內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是挑選適宜的內(nèi)標(biāo)物。內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是原樣品中不存在的純物質(zhì)，該物質(zhì)的性質(zhì)應(yīng)盡或許與欲測組分鄰近，不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng)，一起要能撤底溶于被測樣品中。內(nèi)標(biāo)物的峰應(yīng)盡或許挨近欲測組分的峰，或位于幾個欲測組分的峰中間，但須與樣品中的所有峰不重疊，即撤底分開。

內(nèi)標(biāo)法的長處：進樣量的改變，色譜條件的細小改變對內(nèi)標(biāo)法定量成果的影響不大，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取，衍生化等）前參加內(nèi)標(biāo)物，然后再進行前處理時，可部分補償欲測組分在樣品前處理時的丟失。若要取得很高精度的成果時，能夠參加數(shù)種內(nèi)標(biāo)物，以進步定量剖析的精度。

內(nèi)標(biāo)法的缺陷：挑選適宜的內(nèi)標(biāo)物比較困難，內(nèi)標(biāo)物的稱量要精卻，操作較費事。運用內(nèi)標(biāo)法定量時要丈量欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的兩個峰的峰面積（或峰高），依據(jù)差錯疊加原理，內(nèi)標(biāo)法定量的差錯中，因為峰面積丈量引起的差錯是規(guī)范曲線法定量的2-2是因為進樣量的改變和色譜條件改變引起的差錯，內(nèi)標(biāo)法比規(guī)范曲線法要小許多，所以總的來說，內(nèi)標(biāo)法定量比規(guī)范曲線法定量的精卻度和精蜜度都要好。

規(guī)范參加法

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規(guī)范參加法實質(zhì)上是一種特別的內(nèi)標(biāo)法，是在挑選不到適宜的內(nèi)標(biāo)物時，以欲測組分的純物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)物，參加到待測樣品中，然后在相同的色譜條件下，測定參加欲測組分純物質(zhì)前后欲測組分的峰面積（或峰高），從而核算欲測組分在樣品中的含量的辦法。

規(guī)范參加法的長處：不需求別的的規(guī)范物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，只需欲測組分的純物質(zhì)，進樣量不用十分精精，操作簡略。若在樣品的前處理之前就參加已知精卻量的欲測組分，則能夠徹底補償欲測組分在前處理過程中的丟失，是色譜剖析中較常用的定量剖析辦法。

規(guī)范參加法的缺陷：要求參加欲測組分前后兩次色譜測定的色譜條件撤底相同，以保證兩次測守時的校對因子撤底相等，不然將引起剖析測定的差錯。

挑選內(nèi)標(biāo)物有4個要求：

1.內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；

2.它需求撤底溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能撤底分離；

3.參加內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)挨近于被測組分；

4.色譜峰的方位應(yīng)與被測組分的色譜峰的方位鄰近，或在幾個被測組分色譜峰中間。

內(nèi)標(biāo)法的長處是測定的成果較為精卻，因為通過丈量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對值來進行核算的，因而在必定程度上消除了操作條件等的改變所引起的差錯。內(nèi)標(biāo)法的缺陷是操作程序較為費事，每次剖析時內(nèi)標(biāo)物和試樣都要精卻稱量，有時尋覓適宜的內(nèi)標(biāo)物也有困難。

外標(biāo)法簡潔，但進樣量要求十分精卻，要嚴(yán)厲操控在與規(guī)范物相同的操作條件下進行，不然形成剖析差錯，得不到精卻的丈量成果。

內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都是定量的一種辦法而已，至于哪一種辦法好與欠好不能混為一談，做不同的剖析，面對著不同的要求，再加上剖析本錢剖析效率等等問題，我想簡略而有效進行定量剖析來滿意要求才是重要的。

下面用幾個比方來說明：

1、以前做過許多醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量剖析，沒有自動進樣器，用外標(biāo)法定量，的確重現(xiàn)性與安穩(wěn)性十分差，成果經(jīng)常遭到搞合成搭檔的質(zhì)疑。其實，仔細剖析原因不必定便是外標(biāo)法不適合這種定量剖析，首要我們的試驗室儀器和手法是否調(diào)整到一種安穩(wěn)而合理的狀況了，比方，襯管是否潔凈，玻璃棉的方位是否適宜恰當(dāng)（能否使樣品盡或許的汽化）、汽化溫度是否適宜、色譜峰形是否對稱（也便是樣品與色譜柱健合相是否匹配）、鄰近有沒有其它色譜峰的干擾、選用什么進樣辦法（如快速進樣仍是熱針進樣）等等要素的影響都需求考慮，假如這些要素都考慮了，依照GMP辦法驗證關(guān)于精蜜度的要求，同一樣品進6針以上的RSD和制造6個樣品的定量成果RSD都能滿意小于1.5%的要求，那么這個辦法用外標(biāo)法便是撤底適用的，可是前面的影響要素是必定要都考慮到的，不然議論這個辦法是否適用就有失偏頗了。在做過的許多出口產(chǎn)品的定量剖析辦法傍邊有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗證過的辦法，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（他們用的都是自動進樣）精蜜度都能滿意RSD小于1.5%的要求，當(dāng)一個辦法能夠滿意測試要求的時分，無論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的，當(dāng)然有一個剖析本錢和剖析時間的問題，內(nèi)標(biāo)的本錢和操控溶液、樣品溶液的制造當(dāng)然要比外標(biāo)要高和費事一些了。而有些時分，或許受你試驗室現(xiàn)有儀器和隸屬設(shè)備的影響，達不到必定的要求，而還須進行定量剖析，有時外標(biāo)的成果或許就要差一些，這時，你或許就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了，能夠掃除手動進樣的差錯、分流歧視的影響、包括一些未知要素平行差錯的影響，這時內(nèi)標(biāo)或許就顯示出它的優(yōu)勢來了。

2、上面已經(jīng)說到當(dāng)做辦法驗證的時分，當(dāng)同一樣品制造6個樣品溶液用所選用的外標(biāo)法進行定量的時分，RSD都滿意1.5%的要求時，也分為兩種情況，小于1%和大于1%小于1.5%。假如RSD的成果小于1%，那這個辦法就沒有什么能夠懷疑的了；假如RSD的成果大于1%而在1.5%略低一些的規(guī)模活動時，這個辦法的可行性就將遭到質(zhì)疑，究竟這是辦法驗證，你就要考慮上面1所說到的影響要素的影響了，假如掃除掉以上的影響要素，RSD仍是在1.5%鄰近，就要嘗試內(nèi)標(biāo)了，假如內(nèi)標(biāo)成果的RSD很好，就證明你的這個辦法受試驗條件的影響很大，只能用內(nèi)標(biāo)了，或者干脆將原辦法做大的變化，再嘗試用外標(biāo)法測試。

3、而關(guān)于微量剖析，比方農(nóng)藥和獸藥殘留的剖析、環(huán)境剖析等，依據(jù)不同的定量規(guī)范要求關(guān)于精蜜度的要求也比常量剖析的要求要寬松的多，RSD有時能夠答應(yīng)到達10%乃至更高，這時或許外標(biāo)法有更大的使用空間。

4、單從精蜜度方面去考慮，掃除其它本錢和效率的要素，個人認為仍是內(nèi)標(biāo)優(yōu)于外標(biāo)。曾經(jīng)做過一個中間體二氨基丙醇的常量定量剖析，以二乙醇胺為內(nèi)標(biāo)，RTX-5amine（堿改性）15m*0.32mm*1.0um色譜柱剖析，將制造好的操控溶液（含有內(nèi)標(biāo)物）自動進樣器進6針，目的物（二氨基丙醇）與內(nèi)標(biāo)物（二乙醇胺）峰面積比率的RSD為0.18%，而只對這六針樣品的目的物峰（二氨基丙醇）面積求RSD，成果為0.71%，通過這一實例的成果大家就會發(fā)現(xiàn)究竟哪個辦法精蜜度更好了，當(dāng)然是內(nèi)標(biāo)更好了。當(dāng)然這個化合物的檢測辦法后依據(jù)上面的驗證數(shù)據(jù)用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)定量都是能夠的，試驗室能夠自由挑選。但內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)精蜜度成果的差異是明顯存在的現(xiàn)實。

小結(jié)

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綜上所述，假如使用外標(biāo)法能夠滿意要求的話，當(dāng)然仍是外標(biāo)法，究竟簡略而省勁。關(guān)于精蜜度要求比較高、成果精卻度會產(chǎn)生重大影響、試驗室條件不是很理想的等等條件下，用內(nèi)標(biāo)法仍是必要的。但無論使用那種辦法，辦法的驗證和承認都是很重要的，只要是依照程序通過驗證和承認的辦法，都有其使用的空間的。以上內(nèi)容觀點，僅供大家參考。